Espectrofotometria
Se le llama espectrofotometría a la medición de la cantidad de energía
radiante que absorbe un conjunto de elementos o un elemento en su estado
puro, en función de la longitud de onda de la radiación
lumínica y a las
mediciones
a una determinada longitud de onda
Ley de lambert y Beer: los fundamentos de la interrelación de la luz que
se absorbe y la
que se transmite
Ley de Lambert: cuando
un rayo de luz monocromática (I0) pasa
a través de
un medio absorbente, su intensidad
disminuye exponencial
mente (I) amedida
que la longitud del medio absorbente aumenta
Ley de Beer: Cuando
un rayo de luz monocromática pasa a través de
un medio absorbente, su
intensidad disminuye exponencial mente a medida que
la concentración del medio absorbente aumenta
I = I0e-ac
ESPECTROSCOPÍA
La espectroscopia es el estudio del espectro de la
luz que emiten los
cuerpos,sustancias y elementos.
De este estudio se puede conocer la composición,
temperatura,densidad,
velocidad de desplazamiento y otros factores que
les son propios y componen
a estos cuerpos, sustancias o elementos
Hay varios tipos de espectros, los más comunes son
los espectros continuos, espectros de emisión y los espectros
de absorción.
Si es colocado frente al espectroscopio se podrá
ver, un elemento:
En situaciones en las que se le somete altas
temperaturas y presiones y no se presentan líneas obscuras se trata de
un espectro continuo.
en situaciones normales y se observan unas
líneas de colores frente a un
fondo negro, se trata de un espectro de emisión.
fondo negro, se trata de un espectro de emisión.
por último si sucede la primer situación y
entre el elemento afectado y el espectroscopio se coloca un elemento a
menor temperatura que el primero, se obtiene el espectro de absorción
La electroforesis
Es una técnica de separación que consiste en el transporte de iones a través de
una disolución por acción de un campo
eléctrico.
la velocidad de migración en un sistema
electroforético es:
*Inversamente
proporcional a la viscosidad del medio.
*Proporcional a la
fuerza aplicada al campo.
*Proporcional a la
carga neta de la molécula
*Inversamente
proporcional al tamaño de la molécula.
*Inversamente
proporcional al coeficiente de fricción.
Ventajas: Separación,
visualización y cuantificación del numero de proteínas de
una solución.
Desventajas: Afecta la estructura de las proteínas por lo tanto,
también afecta
la función de la misma.
Movimiento iónico en un campo eléctrico
Durante el proceso de migración de una
partícula cargada en un campo
eléctrico, dependiendo de la carga neta ocurrirá lo
siguiente:
Si la partícula posee carga +
se moverá hacia el cátodo.
Si la partícula posee carga – se moverá hacia el
ánodo.
Si la partícula no posee carga no se moverá
PARÁMETROS QUE INFLUYEN EN LA MOVILIDAD ELECTROFORÉTICA
Tenemos:
1)Parámetros externos
Campo eléctrico
Temperatura
2)Parámetros relacionados con el solvente y con el sistema electroforético
Viscosidad
Fuerza iónica
La naturaleza de los iones componentes
El pH
3)Parámetros relacionados con el soluto
La carga
La forma y tamaño de los iones
EQUIPO ELECTROFORÉTICO:
componentes:
*Fuente de alimentación
*Dos
electrodos
ánodo (+)
cátodo (-)
*Cubeta
*Tampón de electroforesis
*Soporte electroforético
(gel)
proceso Electroforético
electroforesis libre:Una disolución tamponada de la mezcla de
proteínas se
proteínas se
coloca
en una célula de observación en forma de U.
Electroforesis de zona :La disolución a tratar se aplica como una mancha ,
o
como
una banda, y las partículas migran a través del disolvente,
utilizando
utilizando
a demás
un medio de soporte inerte y homogéneo, tal
como el papel o ciertos
tipos
de geles.
Cámaras horizontales: En la electroforesis de tipo horizontal
generalmente, se
trabaja
con ADN o ARN.
Cámaras verticales: En la electroforesis de tipo vertical, se analizan
tanto
moléculas
de ADN como proteínas.
Factores que afectan la Electroforesis
*Tamaño
*Intensidad del campo eléctrica
*Temperatura
*Medio de soporte
*Buffer
